|
Флуоресцентные белки: группа TurboColors
См. также:
Лишенные промоторов
векторы для анализа
генной экспрессии
|
Группа TurboColors объединяет белки, обладающие высоким уровнем флуоресценции, скорость созревания которых при 37°С превосходит скорость созревания остальных флуоресцентных маркеров, доступных на рынке. Эти белки идеально подходят для анализа активности промоторов в живых клетках. Для анализа быстротечных изменений в активности промоторов мы рекомендуем использовать дестабилизированные версии флуоресцентных белков (-dest1), содержащие специфическую последовательность, обеспечивающую быструю деградацию белка в клетке.
Благодаря высокой интенсивности флуоресценции, белки группы TurboColors очень удобны для мечения клеток (например, при анализе эффективности трансфекции). Несмотря на склонность к образованию димеров, белки этой группы могут быть сшиты с сигналами внутриклеточной локализации для направления их в определенные клеточные структуры. TurboFP635 - белок, обладающий флуоресценцией в дальне-красной области спектра, рекомендуется для мечения клеток внутри целых организмов.
|
Спектральное разнообразие
|
|
Нормализованные спектры возбуждения и эмиссии белков группы TurboColors.
Увеличить
|
|---|
Таблица основных свойств белков группы TurboColors
| БЕЛОК |
TurboGFP | TurboYFP | TurboRFP | TurboFP602 | TurboFP635 | TurboFP650 |
| Яркость, произведение коэффициента молярной экстинкции и квантового выхода флуоресценции, деленное на 1000;
К экст., коэффициент молярной экстинкции.
|
| Цвет флуоресценции | зеленый | желтый |
красно-оранжевый |
красный |
дальне-красный |
дальне-красный / инфракрасный |
| Максимум возбуждения (нм) | 482 |
525 |
553 |
574 |
588 |
592 |
| Максимум эмиссии (нм) | 502 |
538 |
574 |
602 |
635 |
650 |
| Квантовый выход | 0.53 |
0.53 |
0.67 |
0.35 |
0.34 |
0.24 |
| К экст. (M-1cm-1) | 70 000 |
105 000 |
92 000 |
74 000 |
65 000 |
65 000 |
| Яркость | 37.1 |
55.7 |
61.6 |
26.0 |
22.1 |
15.6 |
| Яркость, % от EGFP | 112 |
169 |
187 |
79 |
67 |
47 |
| Фотостабильность | высокая | высокая | высокая | высокая | высокая | высокая |
| pKa | 5.2 |
5.9 |
4.4 |
4.7 |
5.5 |
5.7 |
| Структура | димер |
димер |
димер |
димер |
димер |
димер |
| Токсичность для клеток | нет |
при высоких конц. |
нет |
нет |
нет |
нет |
| Агрегация | нет |
при высоких конц. |
нет |
нет |
нет |
нет |
| Скорость созревания при 37°C | очень быстрая |
очень быстрая |
очень быстрая |
быстрая |
очень быстрая |
очень быстрая |
| Молекулярный вес (кДа) | 26 |
26 |
26 |
26 |
26 |
26 |
Примеры использования
Высокая скорость созревания белков группы TurboColors приводит к более раннему возникновению флуоресцентного сигнала, что позволяет использовать эти белки для анализа активности ранних промоторов.
|
|
Сравнение скорости созревания EGFP и TurboGFP в развивающемся зародыше Xenopus laevis.
Векторы для экспрессии флуоресцентных белков под контролем CMV промотора были инъецированы в анимальное поле эмбрионов на стадии двух бластомеров. Флуоресцентный сигнал TurboGFP был детектирован уже на стадии средней гаструлы, сразу после активации генной экспрессии в эмбрионах.
|
Данные любезно предоставлены А. Зарайским (ИБХ, Россия). |
Белки группы TurboColors были протестированы в качестве партнеров слияния с сигналами внутриклеточной локализации и с рядом олигомеризующихся клеточных белков, а так же при создании стабильно трансфецированных клеточных линий.
|
|
Стабильно трансфецированные линии клеток, экспрессирующие белки группы TurboColors.
PhiYFP(m) - варианты TurboYFP, имеющие сходные спектры флуоресценции, но несколько меньшую скорость созревания и яркость. Эти варианты не образуют агрегатов и не проявляют токсичности при высоких концентрациях. Fib - фиблилларин, peroxi - сигнал локализации в пероксисомах, mito - сигнал локализации в митохондриях
|
Фотографии любезно предоставлены К. Пецельтом (Германия). |
|
