|
Лентивирусные конструкции для РНК-интерференции
- Подробнее о лентивирусных векторах
|
РНК-интерференция (RNAi) – это явление, при котором короткие двуцепочечные РНК (siRNA) инициируют подавление экспрессии генов в результате сиквенс-специфической деградации комплементарной мРНК. РНК-интерференция стала эффективным экспериментальным орудием, позволяющим регулировать экспрессию генов.
Компания Евроген предлагает лентивирусную систему для доставки и стабильной экспрессии siRNA в культурах клеток.
Лентивирусные векторы – эффективное средство доставки чужеродных генов в различные клетки-мишени, в т.ч.неделящиеся первичные клетки и трудно трансфецируемые клеточные линии.
Лентивирусный вектор pGPV содержит Н1 промотор для экспрессии shRNA – двуцепочечной РНК со шпилечной структурой, которая в клетке-мишени в результате процессинга превращается в siRNA (см. схему).
Вектор pGPV несет ген устойчивости к пуромицину и флуоресцентный белок CopGFP, позволяя детектировать трансфецированные клетки с помощью флуоресценции и проводить их селекцию на антибиотике (пуромицине).
|
Материалы, предоставляемые Заказчиком:
-
Нуклеотидная последовательность siRNA длиной 19-25 нуклеотиов.
Последовательности функционально активных siRNA/shRNA можно найти по
генам-мишеням в существующих базах данных, например:
Для самостоятельного дизайна siRNA вы можете воспользоваться он-лайн
ресурсами, например:
При самостоятельном дизайне рекомендуется заказывать 3-5 вариантов
siRNA для последующего выбора наиболее эффективной последовательности.
Описание работ:
| СЕРВИС | КАТ.# | ОПИСАНИЕ | ЦЕНА, РУБ. | СРОК ВЫПОЛНЕНИЯ |
|---|
Цены действительны на территории Российской Федерации и не включают доставку.
*При заказе трех и более лентивирусных конструкций предусмотрена скидка 10%.
Внимание! В случае невозможности исполнения заказа CS052 по причине цитотоксического действия кодируемой siRNA на клетки-продуценты лентивирусных частиц сервис CS051 подлежит оплате в полном оъбеме, за сервис CS052 взимается оплата 5000 руб. за каждую лентивирусную конструкцию.
|
| Конструирование и наработка лентивируса для РНК-интерференции |
CS051 |
Синтез пары олигонуклеотидных последовательностей, кодирующей shRNA, не более 70 н.о., конструирование лентивирусного вектора, кодирующего shRNA, подтверждение секвенированием
|
14200* |
2 недели |
| CS052 |
Наработка лентивирусных частиц с титром 105-106 TU/ml в клетках 293Т в культуральной среде DMEM, определение титра
|
30000 |
3 недели |
Результат работы (передается Заказчику):
1. ДНК сконструированного лентивирусного вектора, в количестве не менее 3 мкг
2. 10 мл готовых к работе лентивирусных частиц с титром 105-106 TU/мл в среде DMEM
3. Карта вектора и отчет о результатах работы
 |
 |
 |
Анализ эффективности siRNA в культурах клеток.
(А) Схема образования siRNA при экспрессии вектора pGPV.
(Б) Клетки НЕК293, ко-трансфецированные плазмидой pTagRFP и лентивирусным вектором, кодирующим anti-TagRFP siRNA.
(В) Клеточная линия HeLa, стабильно экспрессирующая TagRFP, через 3 дня после трансдукции лентивирусом, кодирующим anti-TagRFP siRNA.
Красная флуоресценция – экспрессия TagRFP. Зеленый флуоресцентный маркер CopGFP служит для детекции трансфецированных (Б) или трансдуцированных (В) клеток. |
Вниманию заказчика
В случае невозможности исполнения заказа, возникшей по вине заказчика (например, неверно предоставленной информации о нуклеотидной последовательности, присланных некачественных биологических материалах), произведенные услуги подлежат оплате в полном объеме.
Конфиденциальность
Евроген гарантирует сохранение конфиденциальности данных, полученных в процессе выполнения и обсуждения заказа.
|
){kind=link}