Синтез олигонуклеотидов

Синтез и амплификация кДНК "в одной пробирке"

- Наборы с возможностью оптимизации реакционной смеси под конкретную задачу
- Готовая смесь для рутинной ОТ-ПЦР, без контроля No RT

Проведение обратной транскрипции и ПЦР в одной пробирке позволяет сократить время подготовки и проведения реакции, а также снизить вероятность контаминации за счет уменьшения количества манипуляций с образцом. Одностадийную ОТ-ПЦР чаще всего используют для одновременной обработки большого количества образцов РНК.

Наборы и смесь OneTube можно использовать для решения задач:

  • Анализ экспрессии генов,
  • Обнаружение и количественная оценка вирусов,
  • Количественная оценка РНК или ДНК и т.п.

При одноэтапной стратегии вся синтезирующаяся кДНК попадает в ПЦР и недоступна для других приложений.

Обратная транскрипция и амплификация кДНК: в одну или в две стадии?

Формат наборов OneTube RT-PCR TaqMan и OneTube RT-PCR SYBR предусматривает контроль пробы РНК на присутствие примеси геномной ДНК в реакции без ревертазы. Раздельная комплектация ревертазы и ПЦР-смеси позволяет точечную оптимизацию состава реакционной смеси в зависимости от задачи.
Готовая смесь OneTube RT-PCRmix содержит ревертазу и ПЦР-смесь в одной пробирке. Соотношение компонентов оптимально для рутинной постановки ОТ-ПЦР .

Основные свойства

  • Термостабильная ревертаза (55°С) обладает высокой процессивностью и точностью синтеза кДНК, лишена активности РНКазы H;
  • HS Taq ДНК-полимераза "с горячим стартом" обладает 5' → 3' полимеразной и экзонуклеазной активностью;
  • Все компоненты оптимизированы для длительного хранения в замороженном виде и допускают до 10 циклов размораживания;
  • Детекция накопления ПЦР-продукта происходит в режиме реального времени:
    - с использованием флуоресцентных зондов типа TaqMan (набор OneTube RT-PCR TaqMan, смесь OneTube RT-PCRmix);
    - с помощью интеркалирующего красителя (набор OneTube RT-PCR SYBR, смесь OneTube RT-PCRmix – при добавлении SYBR Green I ).

Преимущества

  • Сниженная вероятность контаминации по сравнению с двухстадийным протоколом синтеза кДНК;
  • Увеличенная специфичность за счет термостабильной ревертазы и "горячего старта" амплификации;
  • В одном анализе могут определяться как РНК-, так и ДНК-мишени. При этом применяется один и тот же протокол ОТ-ПЦР;
  • Гибкость при выборе метода детекции амплифицированного продукта: флуоресцентные зонды или интеркалирующие красители;
  • Устойчивость к ингибиторам ОТ-ПЦР в концентрациях, характерных для НК, выделенных стандартными методами.

Рекомендации по использованию

  • Предназначены для использования с ген-специфичными праймерами;

   Схема вариантов расположения праймеров для анализа РНК эукариот

  • Рекомендуемая длина ампликонов – до 300 п.о.;
  • Рекомендуемое количество РНК на одну реакцию – до 300 нг.

OneTube RT-PCR TaqMan

Набор OneTube RT-PCR TaqMan Набор OneTube RT-PCR TaqMan

Результат ОТ-ПЦР фрагмента гена DKC с помощью набора OneTube RT-PCR TaqMan.

Матрица – последовательные разведения тотальной РНК человека в 4 раза (от 450 нг до 110 пг на старт реакции).

А – график нарастания флуоресценции при амплификации.
Б – калибровочный график.

OneTube RT-PCR SYBR

Набор OneTube RT-PCR SYBR Набор OneTube RT-PCR SYBR

Результат ОТ-ПЦР фрагмента гена β2M с помощью набора OneTube RT-PCR SYBR.

Матрица – последовательные разведения тотальной РНК человека в 10 раз (от 100 нг до 10 пг на старт реакции).

А – график нарастания флуоресценции при амплификации.
Б – калибровочный график.

ПРОДУКТ КАТ.# РЕВЕРТАЗА И ПОЛИМЕРАЗА СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ КОЛИЧЕСТВО РЕАКЦИЙ ЦЕНА,
РУБ.
ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Набор OneTube RT-PCR TaqMan SK031S    В отдельных пробирках Флуоресцентные зонды типа TaqMan 100
SK031M    500
Набор OneTube RT-PCR SYBR SK032S Интеркалирующий краситель SYBR Green I (входит в состав смеси) 100
SK032M 500
Смесь OneTube RT-PCRmix
Новинка
SK101S В одной пробирке Флуоресцентные зонды типа TaqMan или интеркалирующие красители 100
SK101M 500

Хранение и транспортировка: -20 °С, не более 10 циклов замораживания.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год со дня поставки.

Связанные продукты

развернуть
ПРОДУКТ КАТ.# ОПИСАНИЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕНА, РУБ. ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Цена действительна на территории Российской Федерации и не включает доставку. Цена у дистрибьюторов может отличаться от приведенной на сайте. Продукт предназначен для научно-исследовательских работ, осуществляемых квалифицированным персоналом. Продукт не предназначен для лечения и диагностики заболеваний.
Реактивы для фиксации, выделения и очистки РНК
Фиксатор IntactRNA BC031 Фиксатор для стабилизации клеточной РНК в тканях и клеточных культурах (аналог RNAlater) на 100 фиксаций по 100 мг ткани
Реагент ExtractRNA
Условия доставки
BC032 Реагент для выделения суммарной РНК из биологических образцов (аналог TRIzol) на 100 выделений из 100 мг ткани
Набор CleanRNA Standard BC033 Набор для очистки препаратов суммарной РНК 25 процедур
Ревертазы и наборы для синтеза кДНК
Набор MMLV RT SK021 Обратная транскриптаза MMLV дикого типа для синтеза первой цепи кДНК с одноцепочечной РНК-матрицы 5000 ед.
более 50 р-ций
Обратная транскриптаза MMLV  SK022S 10000 ед.
более 100 р-ций
SK022L 50000 ед.
более 500 р-ций
Набор для синтеза кДНК Mint SK001 Mint – генетическая модификация ревертазы MMLV. Предназначена для приготовления амплифицированных библиотек кДНК,обогащенных полноразмерными кодирующими последовательностями 20 р-ций по 10 мкл
Набор для синтеза кДНК Mint-2 SK005
Обратная транскриптаза Mint SK003 20 000 ед.
100 р-ций по 10 мкл
или 50 р-ций по 20 мкл